产品货号:
ALH106
中文名称:
PAGE胶DNA纯化回收试剂盒
英文名称:
PAGE gel DNA Recovery Kit
产品规格:
50次
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒采用新型硅基质膜离心柱及特殊的缓冲液系统,可从聚丙烯酰胺凝胶中简捷高效回收20bp~500bp的短片段DNA片段,回收效率可高达85%。并可最大限度去除杂质,获得高纯度的DNA,所得到的DNA可直接用于酶切、连接、测序等后续的分子生物学试验。
- 适用范围广泛,可以回收20bp~2kb的单链或者双链DNA。
- 使用优质结合液,不含传统结合液的碘化钠和高氯酸盐,不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
- 独特的配方保证了该试剂盒比一般试剂盒回收效率大大提高。
- 快速、方便离心柱型,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。
组分 | 规格 |
平衡液 | 5mL |
Binding Buffer | 40mL |
Diffusion Buffer | 30mL |
漂洗液WB | 13mL |
洗脱缓冲液EB | 15mL |
吸附柱EC | 50个 |
收集管(2mL) | 50个 |
保存:RT,有效期12个月
- 第一次使用前请先在40mL Binding Buffer瓶中加入60mL异丙醇!
- 第一次使用前请先在13mL漂洗液WB中加入52mL无水乙醇,加入后请及时打钩标记,以免多次加入!
- 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机。
- 结合液中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。
- 电泳时最好使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。
- 切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤。也可以选择可见光染料染色后在可见光下切胶会避免紫外对DNA损伤。
- 回收率与片段大小、凝胶浓度、初始DNA量和洗脱体积有关。
- 切取含DNA片段的PAGE凝胶(100mg左右,尽可能多地把多余的胶切除,否则会影响回收效率),放入1.5mL离心管中,用移液枪头尽可能捣碎(最好先在酒精灯上将枪头的口烧密闭再用于捣碎),捣得越细越好。
- 向凝胶中加入1~2倍体积的Diffusion Buffer(如100mg凝胶加入100~200μL Diffusion Buffer),55℃温浴30分钟~2小时,期间每15分钟涡旋震荡混匀,促进胶中DNA扩散到溶液中。
一般来说,回收片段越大,DNA扩散需要的时间越长,100bp左右的DNA片段温浴30分钟就可以(时间长些也不影响回收效果);如果回收500bp~1000bp的DNA片段,可以将温浴时间延长3~5个小时。也可以37℃温浴12~16小时过夜。 - 12000rpm离心5分钟。小心取上清转入新的离心管。记录上清体积。
- 加入9倍上清体积的Binding Buffer,混匀。
回收片段>100bp时,加5倍上清体积的Binding Buffer即可。
平衡液预处理吸附柱:
使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤,具体方法参见前文“关于平衡液的使用”。 - 将上一步所得溶液加入吸附柱EC中(吸附柱放入收集管中),室温放置1分钟,12000rpm离心30~60秒,倒掉收集管中的废液。
吸附柱最大容积为750μL,若溶液体积大于750μL,可分批加入。 - 加入600μL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12000rpm离心30秒,弃掉废液。
- 重复步骤6一遍。
- 将吸附柱EC放回空收集管中,13000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
- 取出吸附柱EC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加30~50μL洗脱缓冲液EB,室温放置2钟,12000rpm离心1分钟。如果需要较高浓度核酸,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,离心1分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要核酸浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于25μL,体积过小降低核酸洗脱效率,减少产量。
关于平衡液的使用:
- 介绍:核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团,提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液,若不小心碰到,请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖,以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成,请加热至37℃使沉淀完全消失。
- 使用方法:取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中,吸取100μL的平衡缓冲液至柱子中。13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中废液,将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。
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